ΠΕΡΙΛΗΨΗ

Η τεχνική παρασκευής ημίλεπτων ιστικών τομών σε ρητίνη είναι ιδιαίτερα χρήσιμη σ' ένα Παθολογοανατομικό Εργαστήριο, τόσο για διαγνωστικούς σκοπούς όσο και για ερευνητικά πρωτόκολλα. Στο εργαστήριό μας χρησιμοποιήσαμε αυτήν την τεχνική για τη μελέτη αναγέννησης του περονιαίου νεύρου μετά από διατομή και συρραφή. Επιπλέον, ενισχύσαμε τα αποτελέσματά μας με ανοσοϊστοχημικές χρώσεις που έγιναν στις τομές μετά από την αφαίρεση της ρητίνης. Στην εργασία αυτή παρουσιάζουμε τις τροποποιήσεις που εφαρμόσαμε στην κλασική μέθοδο παρασκευής ημίλεπτων τομών σε ρητίνη, μια απλή ιστοχημική χρώση και μια ανοσοϊστοχημική μέθοδο. Συνοπτικά, ο ιστός τεμαχίζεται και κατόπιν κατάλληλης επεξεργασίας σκηνώνεται σε ρητίνη. Κόβονται τομές πάχους 1 μ. Για ανοσοϊστοχημική χρώση οι τομές απορητινοποιούνται σε κεκορεσμένο διάλυμα NaOH σε αλκοόλη. Σε δοκιμές που προηγήθηκαν αποδείχτηκε ότι η αφαίρεση της ρητίνης με αυτόν τον τρόπο, πριν εφαρμοστεί η ανοσοϊστοχημική μέθοδος, είναι κριτικής σημασίας για την αναγνώριση των ζητούμενων αντιγόνων. Οι τομές ελέγχονται για την ποιότητα και την καταλληλότητά τους με μια γρήγορη χρώση με εξαιρετικά αραιό διάλυμα Toluidine Blue (0,30%). Σε δοκιμές με διάφορες πυκνότητες του διαλύματος διαπιστώθηκε ότι η ιδανικότερη χρώση επιτυγχάνεται με αραιότερο διάλυμα. Ακολουθεί η κλασική ανοσοϊστοχημική μέθοδος με την τεχνική αβιδίνης-βιοτίνης και DAB ως χρωμογόνο. Στην παρούσα μελέτη χρησιμοποιήθηκε το αντίσωμα για την πρωτεΐνη S-100. Συμπερασματικά, παρουσιάζεται μια εύκολη μέθοδος παρασκευής ημίλεπτων τομών, ένα διάλυμα απορητινοποίησης το οποίο επιτρέπει την άριστη διατήρηση τόσο της μορφολογίας όσο και της αντιγονικότητας του ιστού και μια τροποποιημένη ειδική χρώση που επιτρέπει τον έλεγχο της ποιότητας του ιστού και περαιτέρω μορφομετρικές και ανοσοϊστοχημικές μελέτες.

Λέξεις κλειδιά: Ρητίνη, ημίλεπτη τομή, ανοσοϊστοχημεία, ιστοχημεία.

Υποβλήθηκε: 13.5.2006
Εγκρίθηκε: 23.5.2006

ΠΛΗΡΕΣ ΚΕΙΜΕΝΟ